Voorbereiding van het monster:
Monsterverzameling: Verzamel monsters zoals bloed, weefsel, speeksel en urine volgens het doel van het experiment.
DNA -extractie: gebruik een speciale DNA -extractiekit om DNA uit het monster te extraheren.
PCR -reactiebereiding:
Ontwerpprimers: ontwerpspecifieke primerparen op basis van de doelsequentie voor versterking van sjabloon -DNA.
Bereid het reactiemengsel voor: inclusief sjabloon -DNA, primers, buffer, DNA -polymerase, DNTP's (deoxynucleoside trifosfaten), mg 2+, enz.
Stel PCR -programma in:
PCR -instrumentinstellingen: voer de vooraf ingestelde PCR -cyclusparameters in, zoals 95 graden voorverwarmingstemperatuur, denaturatietemperatuur (zoals 95 graden), gloeitemperatuur (zoals 55 graden), verlengtemperatuur (zoals 72 graden) en het aantal cycli.
PCR -reactie:
Toevoegen monster: voeg het reactiemengsel toe aan de PCR -reactietank of chip en elk monster heeft meestal één reactie goed.
PCR uitvoeren: de PCR -instrumentcycli volgens het preset -programma, inclusief verwarmings-, koel-, gloei- en uitbreidingsstappen.
Productanalyse:
Koeling na versterking: nadat PCR is voltooid, wordt het monster kort gekoeld bij 4 graden.
Elektroforetische scheiding: gebruik gelelektroforese -technologie, zoals agarosegelelektroforese, om PCR -producten van verschillende lengtes te scheiden.
Fluorescentiescanning: fluorescent gemerkte primers stoten licht uit van een specifieke golflengte in het geamplificeerde product, en het PCR -instrument leest deze signalen en registreert ze.
Gegevensverwerking en interpretatie:
Gegevensanalysesoftware: gebruik gespecialiseerde software om het fluorescerende signaal te analyseren en de concentratie of relatieve concentratie van het doelfragment te berekenen.
Resultaatinterpretatie: Bepaal op basis van de PCR -curve en basislijn of de PCR succesvol is, of het doelfragment bestaat en hoeveel het is.
Resultaatopname en behoud:
Noteer de resultaten in het experimentele rapport en bewaar de oorspronkelijke gegevens en monsters correct.